Preview

ФАРМАКОЭКОНОМИКА. Современная фармакоэкономика и фармакоэпидемиология

Расширенный поиск

Клинические испытания набора реагентов для определения рибонуклеиновых кислот коронавируса нового типа (SARS-CoV-2) методом полимеразной цепной реакции c детекцией в режиме реального времени

https://doi.org/10.17749/2070-4909/farmakoekonomika.2022.111

Полный текст:

Аннотация

Цель: разработка и валидация набора реагентов для качественного определения рибонуклеиновых кислот (РНК) коронавируса SARS-CoV-2 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени, адаптированной для использования совместно с наборами для экстракции РНК в автоматическом режиме.

Материал и методы. Оценку клинических свойств набора проводили на биологическом материале (мазки со слизистой ротои носоглотки, мокрота), полученном в ходе лечебно-диагностического процесса. Наличие или отсутствие РНК коронавируса нового типа было подтверждено с помощью набора сравнения. Чувствительность набора определяли с использованием стандартного образца SARS-CoV-2 (EDX SARS-CoV-2 Standard, Bio-Rad Laboratories, США).

Результаты. Выявление коронавируса нового типа проводится по двум участкам генома SARS-CoV-2. По результатам исследования, чувствительность относительно стандартного образца составила 250 копий/мл. Коэффициент вариации полученных значений для образца с концентрацией 104 копии/мл не превышал 5% при тестировании в различных условиях. Диагностическая чувствительность относительно набора сравнения составила 100% (95% доверительный интервал (ДИ) 95,6–100) для мазков из рото- и носоглотки и 100% (95% ДИ 94,8–100) для мокроты. Диагностическая специфичность – 100% (95% ДИ 95,6–100) для мазков из рото- и носоглотки и 100% (95% ДИ 94,8–100) для мокроты. Длительность полного исследования с момента экстракции РНК до получения результата с использованием станции для экстракции РНК составила 3 ч при тестировании 96 образцов.

Заключение. Использование набора реагентов совместно с автоматическими станциями позволяет значительно ускорить проведение анализа и снизить нагрузку на лаборатории в условиях пандемии.

Для цитирования:


Дмитрюкова М.Ю., Голод А.А., Сенина М.Е., Гущин А.Е. Клинические испытания набора реагентов для определения рибонуклеиновых кислот коронавируса нового типа (SARS-CoV-2) методом полимеразной цепной реакции c детекцией в режиме реального времени. ФАРМАКОЭКОНОМИКА. Современная фармакоэкономика и фармакоэпидемиология. 2022;15(2):230-236. https://doi.org/10.17749/2070-4909/farmakoekonomika.2022.111

For citation:


Dmitryukova M.Yu., Golod A.A., Senina M.E., Gushchin A.E. Clinical study of real-time polymerase chain reaction test kit for SARS-CoV-2 ribonucleic acids detection. FARMAKOEKONOMIKA. Modern Pharmacoeconomics and Pharmacoepidemiology. 2022;15(2):230-236. (In Russ.) https://doi.org/10.17749/2070-4909/farmakoekonomika.2022.111

ВВЕДЕНИЕ / INTRODUCTION

Коронавирус второго типа, вызывающий тяжелый респираторный синдром и впервые выявленный в конце 2019 г., относится к семейству Coronaviridae, широко распространенному в среде млекопитающих. До 80% случаев инфекции SARS-CoV-2 протекают бессимптомно [1–3], при этом носители могут заражать других лиц [4].

Симптомы COVID-19 часто схожи с проявлениями других респираторных инфекций, потому необходимы высокоспецифичные и чувствительные методы, позволяющие проводить дифференциальную диагностику. Основным методом этиологической диагностики как острых респираторных вирусных инфекций, так и COVID-19 является исследование биологического материала из верхних и нижних дыхательных путей с помощью амплификации нуклеиновых кислот, наиболее распространенный из которых – метод полимеразно-цепной реакции (ПЦР)1.

Кроме того, лабораторная диагностика используется в целях организации противоэпидемиологических мер, в т.ч. тестирования людей, прибывших из мест с неблагоприятной эпидемиологической обстановкой, контактных лиц, даже не имеющих симптомов заболевания2.

У коронавирусов есть механизмы редактирования ошибок РНК-зависимой РНК полимеразы (RdRP), поэтому скорость мутаций ниже, чем у других РНК-содержащих вирусов [5]. Однако это не исключает накопления замен в геноме вируса [6][7]. Центр по контролю и профилактике болезней (Center for Disease Control and Prevention, CDC) Китая рекомендует использовать для тестирования два участка генома вируса – ORF1ab и ген N [8], CDC США – три участка гена N [9]. Также показали эффективность тест-системы, выявляющие коронавирус нового типа по другим генам – ORF1a, ORF1ab, RdRP, E, N, S [10][11].

Цель – разработка и валидация набора реагентов для качественного определения рибонуклеиновых кислот (РНК) коронавируса SARS-CoV-2 методом ПЦР с детекцией в режиме реального времени, адаптированной для использования совместно с наборами для экстракции РНК в автоматическом режиме.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ / MATERIAL AND METHODS

Определение предела обнаружения / Determination of limit detection

Предел обнаружения определяли с использованием стандартного образца SARS-CoV-2 (EDX SARS-CoV-2 Standard, Bio-Rad, США). Стандарт представляет собой синтетические РНК-транскрипты, содержащие 5 генов коронавируса (E, N, ORF1ab, RdRP и S). Разведение стандарта до концентраций 1000, 500, 250 и 100 копий/мл осуществляли на образцах мазков со слизистой рото- и носоглотки, не содержащих РНК коронавируса нового типа.

Экстракцию РНК проводили с использованием набора реагентов «АмплиПрайм ФАСТ-Р» (ООО «НекстБио», Россия) по методике с использованием автоматической станции для экстракции нуклеиновых кислот Microlab STARlet (Hamilton Bonaduz AG, Швейцария, регистрационное удостоверение № РЗН 2018/6981 от 5 апреля 2018 г.).

Определение воспроизводимости и повторяемости / Determination of reproducibility and repeatability

Воспроизводимость и повторяемость определяли тестированием 60 повторов клинических образцов, содержащих РНК SARS-CoV-2 в концентрации 10копий/мл, полученных из Научно-исследовательского института скорой помощи им. Н.В. Склифосовского после проведения плановых исследований.

Концентрацию SARS-CoV-2 определяли относительно стандартных образцов предприятия (ООО «НекстБио», Россия). Экстракцию РНК проводили с использованием набора реагентов «АмплиПрайм ФАСТ-Р» по методике с использованием автоматической станции для экстракции нуклеиновых кислот Microlab STARlet.

Клинические испытания / Clinical tests

Клинические испытания были проведены с использованием биологического материала, полученного в ходе лечебно-диагностического процесса после проведения плановых лабораторных исследований. Исследованный материал включал:

  • мазки со слизистой носо- и ротоглотки (132 образца);
  • мокроту (112 образцов).

Биологический материал мазков со слизистой носо- и ротоглотки был забран в транспортную среду для хранения и транспортировки респираторных мазков (ООО «НекстБио», Россия, РУ № ФСР 2012/14200).

Экстракцию РНК из 100 мкл биоматериала проводили с помощью наборов реагентов «МагноПрайм ЮНИ» (ООО «НекстБио», Россия) по методике с использованием автоматической станции для экстракции нуклеиновых кислот Microlab STARlet и «АмплиПрайм РИБО-преп» (ООО «НекстБио», Россия) в ручном режиме. Тесты ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ) выполняли на приборах планшетного типа (С1000 Touch в комплекте с модулем CFX96, Bio-Rad Laboratories, США) и роторного типа (Rotor-Gene Q, Qiagen, Германия).

Аналитическую специфичность набора оценивали тестированием нуклеиновых кислот микроорганизмов и вирусов и геномной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) человека. Нуклеиновые кислоты микроорганизмов и вирусов в концентрации не менее 106 копий/мл и геномную ДНК человека в концентрации 1 мкг/мл вносили в образцы биологического материала, не содержащие вирус SARS-CoV-2.

В исследование были включены следующие микроорганизмы: B. parapertussis, B. pertussis, B. bronchiseptica, H. influenzaе, K. pneumonia, S. aureus, S. pneumoniae, L. pneumophilia, P. aeruginosa, вирусы гриппа А H1N1, H3N2, H2N2, H7N9, H0N1, H5N1, вирус гриппа В линии Брисбен, вирус гриппа В линии Пхукет, коронавирусы человека 229Е, NL63, OC43.

Для оценки влияния интерферирующих веществ в исследуемые образцы были внесены муцин (Sigma-Aldrich, США) в концентрации 0,23 мг/100 мкл, гемоглобин (Sigma-Aldrich, США) – 0,20 ммоль/100 мкл, мирамистин (ООО «Инфамед К», Россия) – 0,001% действующего вещества в 100 мкл, хлоргексидин (ОАО НПЦ «Биоген», Россия) – 0,5% действующего вещества в 100 мкл.

В качестве набора сравнения был использован набор реагентов «РеалБест РНК SARS-CoV-2» (АО «Вектор-Бест», Россия). Экстракцию РНК из образцов биоматериала выполняли с помощью набора «РеалБест УниМаг» (АО «Вектор-Бест», Россия), тесты ОТ-ПЦР – на приборе Rotor-Gene Q (Qiagen, Германия).

Этические аспекты / Ethical aspects

Биологический материал, использованный для проведения работы, был получен после рутинных исследований. Дизайн исследования не был связан с риском для пациентов и не оказывал влияния на их права и благополучие. Способ получения материала не позволял провести идентификацию лица, от которого данный материал был получен. Исходя из этого одобрения этического комитета не требовалось.

Методы статистического анализа / Methods of statistical analysis

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием пакета Excel MS Office (Microsoft, США). Расчет клинической чувствительности (Ч) выполняли по формуле:

Ч = А / (А + В),

где А – количество истинно-положительных результатов; В – количество ложноотрицательных результатов.

Расчет клинической специфичности (Сп) проводили по формуле:

Сп = D / (D + C),

где D – количество истинно-отрицательных результатов; С – количество ложноположительных результатов.

Расчет нижней границы 95% доверительного интервала чувствительности (Чн) и специфичности (Спн) выполняли по формулам [12]:

где Zγ – значение γ-квантиля нормального распределения (γ =1−α/2, α = 0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ / RESULTS

Контроль качества / Quality control

Для контроля качества экстракции использовали внутренний контрольный образец, представляющий собой модифицированный фаг MS2. Отсутствие сигнала по внутреннему контролю говорит о неэффективной экстракции РНК из клинического материала, образец признается невалидным, требуется его повторный анализ начиная с этапа экстракции. Все результаты признаны валидными на основании амплификации внутреннего контрольного образца.

Контроль качества проведения анализа осуществляли с помощью положительного контрольного образца, представляющего собой модифицированный фаг MS2, несущий фрагмент РНК SARS-CoV2.

Автоматическая экстракция нуклеиновых кислот / Automatic extraction of nucleic acids

Для валидации автоматического метода экстракции РНК из клинического материала была проведена одновременная экстракция наборами реагентов «АмплиПрайм РИБО-преп» (ручной метод) и «МагноПрайм ЮНИ» с использованием автоматической станции для экстракции нуклеиновых кислот Microlab STARlet. При использовании двух выделительных наборов, а также при проведении ОТ-ПЦР на двух приборах не было получено ни одного ложноположительного и ложноотрицательного результата. Все полученные результаты совпали.

Время, затрачиваемое на проведение экстракции РНК из 96 образцов с использованием станции Microlab STARlet, составило 1 ч 10 мин. Экстракция РНК набором реагентов «АмплиПрайм РИБО-преп» из 12–24 образцов занимает 45 мин. Длительность программы амплификации составляет 90 мин. Таким образом, общее время, затрачиваемое на анализ при использовании автоматической станции, укладывается в 3 ч.

Аналитические характеристики / Analytical characteristics

Результаты определения предела обнаружения при тестировании разведения стандартного образца SARS-CoV-2 представлены в таблице 1, результаты исследования повторяемости и воспроизводимости – в таблице 2.

Таблица 1. Результаты определения предела обнаружения при тестировании разведения стандартного образца SARS-CoV-2
Table 1. Results of limit detection evaluation during testing the standard SARS-CoV-2 sample


Примечание. РНК – рибонуклеиновая кислота; Сt – количество циклов репликации, необходимое для формирования флюоресцентного сигнала; ДИ – доверительный интервал.
Note. RNA – ribonucleic acid; Ct – number of replication cycles required for fluorescent signal; CI – confidence interval.

Таблица 2. Повторяемость и воспроизводимость полученных результатов
Table 2. Repeatability and reproducibility of the results


Примечание. РНК – рибонуклеиновая кислота; Сt – количество циклов репликации, необходимое для формирования флюоресцентного сигнала; ДИ – доверительный интервал; CV – коэффициент вариации.
Note. RNA – ribonucleic acid; Ct – number of replication cycles required for fluorescent signal; CI – confidential interval; CV – variation coefficient.

При исследовании аналитической специфичности перекрестных реакций с указанными возбудителями не выявлено.

Клинические характеристики / Clinical characteristics

Для исследования клинической специфичности и чувствительности нового набора были изучены 244 образца биологического материала одновременно с референсным набором «РеалБест РНК SARS-CoV-2». Все полученные результаты были признаны валидными на основании амплификации внутреннего контроля образца в исследуемом и референсном тестах.

При исследовании 132 образцов мазков со слизистой носои ротоглотки обнаружено 66 образцов, содержащих РНК SARS-COV-2, из 112 образцов мокроты – 56 положительных. Исследование с использованием референсного набора показало полное совпадение положительных и отрицательных результатов. На основании полученных данных была рассчитана диагностическая чувствительность и специфичность с учетом 95% доверительной вероятности. Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3. Диагностическая чувствительность и специфичность набора реагентов «АмплиПрайм SARS-CoV-2 DUO» (ООО «НекстБио», Россия)
Table 3. Diagnostic sensitivity and specificity of the AmpliPrime SARS-CoV-2 DUO reagent kit (NextBio LLC, Russia)


Примечание. ДИ – доверительный интервал.
Note. CI – confidence interval.

Внесение в клинический материал интерферирующих веществ в указанных концентрациях не привело к получению ложноотрицательных результатов.

ОБСУЖДЕНИЕ / DISCUSSION

Молекулярно-биологические методы выявления РНКи ДНК-возбудителей респираторных инфекций широко применяются в клинической практике и служат как для установления этиологической причины заболевания, так и для эпидемиологического надзора. Как показывают события 2020–2021 гг., это играет первостепенную роль в предотвращении распространения пандемии.

По данным коммуникационного штаба Правительства Российской Федерации [13], на начало ноября 2021 г. количество ПЦР-исследований составило более 500 тыс. в день, из них более 40 тыс. были положительными. Такое количество выполняемых анализов неизбежно означает огромную нагрузку на клинико-диагностические лаборатории, поэтому необходимы решения, которые позволили бы проводить исследования в максимально автоматическом режиме и при этом оставались бы экономически оправданными.

Одной из основных задач нашей работы было определение аналитических и диагностических характеристик разработанного набора реагентов с использованием автоматических станций для экстракции нуклеиновых кислот.

Чувствительность набора реагентов при тестировании стандартного образца EDX SARS-CoV-2 составила 250 копии/мл, что равно 0,25 копии/мкл, или 2,5 копии на реакцию. Для сравнения, по имеющимся литературным данным, чувствительность анализа при использовании олигонуклеотидов, предложенных CDC для выявления SARS-CoV-2, составила от 0,3 до 2,1 копии/мкл [14]. Из отечественной практики опубликованы данные об аналитических характеристиках набора реагентов производства ООО «ДНК-Технология» с чуть более низкой чувствительностью: 10 копий на реакцию [15]. Основным различием проведенных исследований является использование нами внешнего количественно охарактеризованного стандартного образца, содержащего РНК SARS-CoV-2, что, возможно, позволило более точно определить чувствительность набора реагентов.

Коэффициент вариации при исследовании воспроизводимости результатов амплификации составил менее 5%. По литературным данным, при валидации наборов реагентов либо были получены схожие значения (не более 5%) [16], либо коэффициент вариации был выше (от 1,16% до 8,65%) [17].

Автоматические станции для выделения нуклеиновых кислот и приготовления ПЦР-смесей имеют ряд преимуществ перед ручными методами экстракции, в первую очередь за счет большей пропускной способности и стандартизованности процедуры экстракции. Длительность исследования с помощью станции для экстракции нуклеиновых кислот Microlab STARlet при анализе 96 образцов составила 1 ч 10 мин. Экстракция такого же количества образцов ручным методом занимает около 3 ч. При использовании автоматической станции весь анализ, включая этап экстракции и амплификации, длится на более 3 ч.

Важным этапом валидации набора реагентов является сравнение результатов с другим набором реагентов, зарегистрированным в Федеральной службе по надзору в сфере здравоохранения в установленном порядке. В качестве набора сравнения нами был использован набор реагентов «РеалБест РНК SARS-CoV-2». Различия в результатах могут быть связаны с разными областями генома, амплифицируемыми в ходе анализа, разной чувствительностью и методами экстракции нуклеиновых кислот. Несмотря на имеющиеся различия, сравниваемые наборы реагентов показали схожую чувствительность и специфичность.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ / CONCLUSION

В ходе исследования был разработан и апробирован набор реагентов «АмплиПрайм SARS-CoV-2 DUO» (ООО «НекстБио», Россия) для выявления коронавируса нового типа. Набор определяет SARS-CoV-2 по двум фрагментам генома, что позволяет повысить надежность анализа. Предел обнаружения составил 250 копий/мл, что достаточно для надежного анализа. Коэффициент вариации при тестировании 120 образцов, содержащих РНК SARS-CoV-2 в концентрации 104 копий/мл, не превышает 5%.

Набор реагентов получил регистрационное удостоверение РЗН № 2020/10837 от 15 июня 2020 г. и может быть использован в клинической практике.

1. Временные методические рекомендации «Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19)». Версия 15 (22.02.2022).

2. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.3597-20 «Профилактика новой коронавирусной инфекции (COVID-19)» от 22.05.2020 № 15.

Список литературы

1. Gorbalenya A.E., Baker S.C., Baric R.S., et al. The species Severe acute respiratory syndrome related coronavirus: classifying 2019-nCoV and naming it SARS-CoV-2. Nat Microbiol. 2020; 5: 536–44. https://doi.org/10.1038/s41564-020-0695-z.

2. Oran D.P., Topol E.J. Prevalence of asymptomatic SARS-CoV-2 infection: a narrative review. Ann Intern Med. 2020; 173 (5): 362–7. https://doi.org/10.7326/M20-3012.

3. Dos Santos W.G. Natural history of COVID-19 and current knowledge on treatment therapeutic options. Biomed Pharmacother. 2020; 129: 110493. https://doi.org/10.1016/j.biopha.2020.110493.

4. Aguirre-Duarte N. Can people with asymptomatic or pre-symptomatic COVID-19 infect others: a systematic review of primary data. medRxiv. April 16, 2020. https://doi.org/10.1101/2020.04.08.20054023.

5. Sevajol M., Subissi L., Decroly E., et al. Insights into RNA synthesis, capping, and proofreading mechanisms of SARS-coronavirus. Virus Res. 2014; 194: 90–9. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2014.10.008.

6. Hu B., Guo H., Zhou P., et al. Characteristics of SARS-CoV-2 and COVID-19. Nat Rev Microbiol. 2021; 19: 141–54. https://doi.org/10.1038/s41579-020-00459-7.

7. Tang X., Wu C., Li X., et al. On the origin and continuing evolution of SARS-CoV-2. Nat Sci Rev. 2020; 7 (6): 1012–23. https://doi.org/10.1093/nsr/nwaa036.

8. Niu P., Lu R., Zhao L., et al. Three novel real-time RT-PCR assays for detection of COVID-19 virus. China CDC Wkly. 2020; 2 (25): 453–7. https://doi.org/10.46234/ccdcw2020.116.

9. CDC’s diagnostic test for COVID-19 only and supplies. URL: https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/lab/virus-requests.html (дата обращения 20.11.2021).

10. Corman V.M., Landt O., Kaiser M., et al. Detection of 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) by real-time RT-PCR. Euro Surveill. 2020; 25(3): 2000045. https://doi.org/10.2807/1560-7917.ES.2020.25.3.2000045.

11. Kubina R., Dziedzic A. Molecular and serological tests for COVID-19 a comparative review of SARS-CoV-2 coronavirus laboratory and point-of-care diagnostics. Diagnostics (Basel). 2020; 10 (6): 434. https://doi.org/10.3390/diagnostics10060434.

12. Красько О.В. Статистический анализ данных в медицинских исследованиях. Часть I. Минск: МГЭУ им. А.Д. Сахарова; 2014: 127 с.

13. Отчeт о текущей ситуации по борьбе с коронавирусом. 3 ноября 2021. URL: https://xn--80aesfpebagmfblc0a.xn--p1ai/ai/doc/1122/attach/2021-11-03_coronavirus_government_report.pdf (дата обращения 20.11.2021).

14. Tastanova A., Stoffel C.I., Dzung A., et al. A comparative study of real-time RT-PCR-based SARS-CoV-2 detection methods and its application to human-derived and surface swabbed material. J Mol Diagn. 2021; 23(7): 796–804. https://doi.org/10.1016/j.jmoldx.2021.04.009.

15. Гончарова Е.В., Донников А.Е., Кадочникова В.В. и др. Диагностика вируса, вызывающего COVID-19, методом ПЦР в реальном времени. ФАРМАКОЭКОНОМИКА. Современная фармакоэкономика и фармакоэпидемиология. 2020; 13 (1): 52–63. https://doi.org/10.17749/2070-4909.2020.13.1.52-63.

16. Watanabe R., Asai S., Kakizoe H., et al. Evaluation of the basic assay performance of the GeneSoc ® rapid PCR testing system for detection of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2. PLoS One. 2021; 16 (3): e0248397. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0248397.

17. Perng C.L., Jian M.J., Chang C.K., et al. Novel rapid identification of Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) by real-time RT-PCR using BD Max Open System in Taiwan. Peer J. 2020; 8: e9318. https://doi.org/10.7717/peerj.9318.


Об авторах

М. Ю. Дмитрюкова
Общество с ограниченной ответственностью «НекстБио»
Россия

Дмитрюкова Марина Юрьевна – к.б.н., старший научный сотрудник. РИНЦ SPIN-код: 3021-2553

ул. Полимерная, д. 8, Москва 111394



А. А. Голод
Общество с ограниченной ответственностью «НекстБио»
Россия

Голод Анастасия Алексеевна – младший специалист по разработке

ул. Полимерная, д. 8, Москва 111394



М. Е. Сенина
Общество с ограниченной ответственностью «НекстБио»
Россия

Сенина Мария Евгеньевна – директор научно-производственного комплекса. РИНЦ SPIN-код: 6122-0490

ул. Полимерная, д. 8, Москва 111394



А. Е. Гущин
Государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Московский научно-практический центр дерматовенерологии и косметологии» Департамента здравоохранения г. Москвы; Общество с ограниченной ответственностью «ИнтерЛабСервис»
Россия

Гущин Александр Евгеньевич – к.б.н., ведущий научный сотрудник; учредитель. РИНЦ SPIN-код: 3496-6893

Ленинский пр-т, д. 17, Москва 119071
ул. Садовническая, д. 20/13, стр. 2, Москва 115035



Рецензия

Для цитирования:


Дмитрюкова М.Ю., Голод А.А., Сенина М.Е., Гущин А.Е. Клинические испытания набора реагентов для определения рибонуклеиновых кислот коронавируса нового типа (SARS-CoV-2) методом полимеразной цепной реакции c детекцией в режиме реального времени. ФАРМАКОЭКОНОМИКА. Современная фармакоэкономика и фармакоэпидемиология. 2022;15(2):230-236. https://doi.org/10.17749/2070-4909/farmakoekonomika.2022.111

For citation:


Dmitryukova M.Yu., Golod A.A., Senina M.E., Gushchin A.E. Clinical study of real-time polymerase chain reaction test kit for SARS-CoV-2 ribonucleic acids detection. FARMAKOEKONOMIKA. Modern Pharmacoeconomics and Pharmacoepidemiology. 2022;15(2):230-236. (In Russ.) https://doi.org/10.17749/2070-4909/farmakoekonomika.2022.111

Просмотров: 170


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International License.


ISSN 2070-4909 (Print)
ISSN 2070-4933 (Online)