farmaecFARMAKOEKONOMIKA. Modern Pharmacoeconomics and PharmacoepidemiologyФАРМАКОЭКОНОМИКА. Современная фармакоэкономика и фармакоэпидемиология2070-49092070-4933IRBIS LLC10.17749/2070-4909/farmakoekonomika.2021.083farmaec-486Research ArticleORIGINAL ARTICLESОРИГИНАЛЬНЫЕ ПУБЛИКАЦИИDifferences in the standardization of medicinal products based on extracts of chondroitin sulfateО различиях в стандартизации лекарственных препаратов на основе экстрактов хондроитина сульфатаhttps://orcid.org/0000-0002-7663-710XГромоваО. А.GromovaO. A.

Громова Ольга Алексеевна – д.м.н., профессор, научный руководитель Института фармакоинформатики ФИЦ «Информатика и управление» Российской академии наук, ведущий научный сотрудник Центра хранения и анализа больших данных ФГБОУ ВО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова». Scopus Author ID: 7003589812; ResearcherID: J-4946-2017; РИНЦ SPIN-код: 6317-9833

ул. Вавилова, д. 4, Москва 2119333Ленинские Горы, д. 1, Москва 119991

Olga A. Gromova – Dr. Med. Sc., Professor, Research Supervisor, Institute of Pharmacoinformatics, Federal Research Center “Informatics and Management”, Russian Academy of Sciences; Leading Researcher, Big Data Storage and Analysis Center, Lomonosov Moscow State University. Scopus Author ID: 7003589812; ResearcherID: J-4946-2017; RSCI SPIN-code: 6317-9833

4 Vavilov Str., Moscow 21193331 Leninskie Gory, Moscow 119991

https://orcid.org/0000-0002-2659-7998ТоршинИ. Ю.TorshinI. Yu.

Торшин Иван Юрьевич – к.ф-м.н., к.х.н., старший научный сотрудник Института фармакоинформатики ФИЦ «Информатика и управление» Российской академии наук; Центр хранения и анализа больших данных ФГБОУ ВО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова». Scopus Author ID: 7003300274; ResearcherID: C-7683-2018; РИНЦ SPIN-код: 1375-1114

ул. Вавилова, д. 4, Москва 2119333Ленинские Горы, д. 1, Москва 119991

Ivan Yu. Torshin – PhD (Phys. Math.), PhD (Chem.), Senior Researcher, Institute of Pharmacoinformatics, Federal Research Center “Informatics and Management”, Russian Academy of Sciences; Big Data Storage and Analysis Center, Lomonosov Moscow State University. Scopus Author ID: 7003300274; ResearcherID: C-7683-2018; RSCI SPIN-code: 1375-1114

4 Vavilov Str., Moscow 21193331 Leninskie Gory, Moscow 119991

tiu135@ccas.ruhttps://orcid.org/0000-0003-4934-8801ЗайчикБ. Ц.ZaychikB. Ts.

Зайчик Борис Цалерьевич – к.т.н., старший научный сотрудник. ResearcherID: J-4946-2017; РИНЦ SPIN-код: 3757-3395

Ленинский пр-т, д. 33, Москва 119071

Boris Ts. Zaychik – PhD (Tech.), Senior Researcher. ResearcherID: J-4946-2017; RSCI SPIN-code: 3757-3395

33 Leninskiy Prospekt, Moscow 119071

https://orcid.org/0000-0001-6589-7654ШихЕ. В.ShikhE. V.

Ших Евгения Валерьевна – д.м.н., профессор, заведующая кафедрой клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней. Scopus Author ID: 6506179061; ResearcherID: B-7786-2018; РИНЦ SPIN-код: 2397-8414

ул. Трубецкая, д. 8/2, Москва 119991

Evgeniya V. Shikh – Dr. Med. Sc., Professor, Chief of Chair of Clinical Pharmacology and Propaedeutics of Internal Diseases. Scopus Author ID: 6506179061; ResearcherID: B-7786-2018; RSCI SPIN-code: 2397-8414

8/2 Trubetskaya Str., Moscow 119991

https://orcid.org/0000-0003-1195-4566РужицкийА. О.RuzhitskiyA. O.

Ружицкий Александр Олегович – научный сотрудник. Scopus Author ID: 7003589812; ResearcherID: J-4946-2017; РИНЦ SPIN-код: 3757-3395

Ленинский пр-т, д. 33, Москва 119071

Aleksandr O. Ruzhitskiy – Researcher. Scopus Author ID: 7003589812; ResearcherID: J-4946-2017; RSCI SPIN-code: 3757-3395

33 Leninskiy Prospekt, Moscow 119071

https://orcid.org/0000-0001-9679-632XГалустянА. Н.GalustyanA. N.

Галустян Анна Николаевна – к.м.н., заведующая кафедрой фармакологии с курсом клинической фармакологии и фармакоэкономики. РИНЦ SPIN-код: 3303-7650

ул. Литовская, д. 2, Санкт-Петербург 194100

Anna N. Galustyan – MD, PhD, Chief of Chair of Pharmacology with a Course in Clinical Pharmacology and Pharmacoeconomics. RSCI SPIN-code: 3303-7650

2 Litovskaya Str., Saint Petersburg 194100

https://orcid.org/0000-0002-1528-411XСардарянИ. С.SardaryanI. S.

Сардарян Иван Суренович – к.м.н., доцент кафедры фармакологии с курсом клинической фармакологии и фармакоэкономики. Scopus Author ID: 572006721; РИНЦ SPIN-код: 9522-9761

ул. Литовская, д. 2, Санкт-Петербург 194100

Ivan S. Sardaryan – MD, PhD, Associate Professor, Chair of Pharmacology with a Course in Clinical Pharmacology and Pharmacoeconomics. Scopus Author ID: 572006721; RSCI SPIN-code: 9522-9761

2 Litovskaya Str., Saint Petersburg 194100

СарвилинаИ. В.SarvilinaI. V.

Сарвилина Ирина Владиславовна – д.м.н., профессор, главный врач. РИНЦ SPIN-код: 7308-6756

ул. Социалистическая, д. 74, Ростов-на-Дону 344002

Irina V. Sarvilina –Dr. Med. Sc., Professor, Chief Physician. RSCI SPIN-code: 7308-6756

74 Sotsialisticheskaya Str., Rostov-on-Don 344002

Институт фармакоинформатики Федерального исследовательского центра «Информатика и управление» Российской академии наук; Центр хранения и анализа больших данных Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова»РоссияInstitute of Pharmacoinformatics, Federal Research Center “Informatics and Management”, Russian Academy of Sciences; Big Data Storage and Analysis Center, Lomonosov Moscow State UniversityRussian FederationИнститут биохимии им. А.Н. Баха, Федеральный исследовательский центр биотехнологии Российской академии наукРоссияBakh Institute of Biochemistry, Federal Research Center for Biotechnology, Russian Academy of SciencesRussian FederationФедеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияSechenov UniversityRussian FederationФедеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииРоссияSaint Petersburg State Pediatric Medical UniversityRussian FederationООО «Медицинский центр «Новомедицина»РоссияMedical Center "Novomeditsina"Russian Federation2021270420211415062Copyright © Gromova O.A., Torshin I.Y., Zaychik B.T., Shikh E.V., Ruzhitskiy A.O., Galustyan A.N., Sardaryan I.S., Sarvilina I.V., 20212021Громова О.А., Торшин И.Ю., Зайчик Б.Ц., Ших Е.В., Ружицкий А.О., Галустян А.Н., Сардарян И.С., Сарвилина И.В.Gromova O.A., Torshin I.Y., Zaychik B.T., Shikh E.V., Ruzhitskiy A.O., Galustyan A.N., Sardaryan I.S., Sarvilina I.V.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmacoeconomics.ru/jour/article/view/486Objective

Objective: a comparative analysis of 6 different chondroprotectors for injection, containing chondroitin sulfate (CS) based on natural extracts.

Material and methods

Material and methods. Five samples were studied for each CS extract. The preparations were compared on the basis of profiles of trace element composition, sulfur content, chromatographic analysis and test for total protein. In each sample, the concentration of 72 elements was determined, then averaging was performed and the variances of the content of each element were calculated. To assess the content of the protein fraction, a modified Lowry method with bicincholic acid was used. Chromatographic profiles of the studied CS extracts were measured to estimate the molecular weight distribution.

Results

Results. The studied samples differ significantly from each other in the total and individual content of sulfur, toxic and conditionally toxic microelements. According to the analysis of sulfur and trace elements, a cluster of more standardized CS extracts was identified. It was shown that the assessments of the pharmaceutical quality of the studied extracts made by the elemental profile, correspond to the assessments of the quality by the degree of proteins elimination and by the molecular weight characteristics of CS extracts. In particular, the highest total content of toxic elements was found for CS-6 (14.87±1.81 μg/l) and CS-2 (9.20±1.12 μg/l), and the lowest – for CS-4 (1.46±0.23 μg/l), CS-3 (1.92±0.33 μg/l) and CS-1 (2.98±0.25 μg/l). The highest content of protein impurities was also found in CS-6 (9.62 mg/ml) and CS-2 (6.64 mg/ml), and the lowest – in CS-1 (2.87 mg/ml). At the same time, the highest amount of sulfur was found CS-1 (6400 mg/kg) and much less – for CS-2 (370 mg/kg) and CS-6 (100 mg/kg). Significant amounts of the high-molecular fraction of CS (1–40 kDa) were found only in CS-1, and only trace amounts of high-molecular CS forms were present in CS-2 and CS-6.

Conclusion

Conclusion. The highest content of cholesterol and sulfur and, at the same time, the lowest content of toxic microelements and proteins were distinguished by the extract obtained from the trachea of a bovine.

Цель

Цель: сравнительный анализ 6 различных хондропротекторов для инъекционного введения, содержащих хондроитина сульфат (ХС).

Материал и методы

Материал и методы. Для каждого экстракта ХС изучено по 5 образцов. Сравнение препаратов проведено на основании профилей микроэлементного состава, содержания серы, хроматографического анализа и теста на общий белок. В каждом образце определяли концентрацию 72 элементов, затем проводили усреднение и рассчитывали дисперсии содержания каждого из элементов. Для оценки содержания белковой фракции применяли модифицированный метод Лоури с бицинхолиновой кислотой. Хроматографические профили исследованных экстрактов ХС измеряли для оценки распределения молекулярной массы.

Результаты

Результаты. Исследованные образцы существенно отличаются друг от друга по суммарному и индивидуальному содержанию серы, токсичных и условно-токсичных микроэлементов. По оценкам анализа на серу и микроэлементы выделен кластер более стандартизированных экстрактов ХС. Показано, что оценки фармацевтического качества исследованных экстрактов, выполненные по элементному профилю, соответствуют оценкам качества по степени очистки от белков и молекулярно-весовым характеристикам экстрактов. В частности, наибольшее суммарное содержание токсичных элементов было найдено для экстрактов ХС-6 (14,87±1,81 мкг/л) и ХС-2 (9,20±1,12 мкг/л), а наименьшие – для ХС-4 (1,46±0,23 мкг/л), ХС-3 (1,92±0,33 мкг/л) и ХС-1 (2,98±0,25 мкг/л). Наибольшее содержание белковых примесей также найдено в экстрактах ХС-6 (9,62 мг/мл) и ХС-2 (6,64 мг/мл), а наименьшее – в ХС-1 (2,87 мг/мл). В то же время наибольшее количество серы выявлено для экстракта ХС-1 (6400 мг/кг) и гораздо меньшее – для ХС-2 (370 мг/кг) и ХС-6 (100 мг/кг). Значительные количества высокомолекулярной фракции ХС (1–40 кДа) были установлены только в экстракте ХС-1, а в экстрактах ХС-2 и ХС-6 присутствовали лишь следовые количества высокомолекулярных форм ХС.

Заключение

Заключение. Наибольшим содержанием ХС и серы (и в то же время наименьшим содержанием токсичных микроэлементов и белков) отличался экстракт, полученный из трахеи быка.

Фармацевтическая стандартизацияхондропротекторыхроматографияэлементный анализхондроитина сульфатPharmaceutical standardizationchondroprotectorschromatographyelemental analysischondroitin sulfateReferencesТогузов Р.Т., Назаренко О.А., Волков А.Ю. и др. Элементный состав как одна из основ гепатопротекторного действия экстракта прогепар. Практическая медицина. 2011; 1: 176.Toguzov R.Т., Nazarenko О.А., Volkov А.Yu. et al. Elemental composition as one of the bases of the hepatoprotective action of the progepar extract. Practical Medicine. 2011; 1: 176 (in Russ.).Громова О.А., Торшин И.Ю., Волков А.Ю. и др. Экстракт лаеннек: элементный состав и фармакологическое действие. Пластическая хирургия и косметология. 2011; 2: 327–33.Gromova O.A., Torshin I.Yu., Volkov A.Yu. et al. Preparation Laennec: elemental composition and key role in the pharmacological action. Plastic Surgery and Cosmetology. 2011; 2: 327–33 (in Russ.).Громова О.А., Торшин И.Ю., Лила А.М., Громов А.Н. Молекулярные механизмы глюкозамина сульфата при лечении дегенеративно-дистрофических заболеваний суставов и позвоночника: результаты протеомного анализа. Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика. 2018; 10 (2): 38–44. https://doi.org/10.14412/2074-2711-2018-2-38-44.Gromova O.A., Torshin I.Yu., Lila A.M., Gromov A.N. Molecular mechanisms of action of glucosamine sulfate in the treatment of degenerative-dystrophic diseases of the joints and spine: results of proteomic analysis. Neurology, Neuropsychiatry, Psychosomatics. 2018; 10 (2): 38–44 (in Russ.). https://doi.org/10.14412/2074-2711-2018-2-38-44.Martel-Pelletier J., Farran A., Montell E., et al. Discrepancies in composition and biological effects of different formulations of chondroitin sulfate. Molecules. 2015; 20 (3): 4277–89. https://doi.org/10.3390/molecules20034277.Martel-Pelletier J., Farran A., Montell E., et al. Discrepancies in composition and biological effects of different formulations of chondroitin sulfate. Molecules. 2015; 20 (3): 4277–89. https://doi.org/10.3390/molecules20034277.Berg P.A., Kaboth U., Becker E.W., Klein R. The analysis of a severe side effect of a cartilage-protective agent by immunological studies. Dtsch Med Wochenschr. 1992; 117 (42): 1589–93 (in German). https://doi.org/10.1055/s-2008-1062480.Berg P.A., Kaboth U., Becker E.W., Klein R. The analysis of a severe side effect of a cartilage-protective agent by immunological studies. Dtsch Med Wochenschr. 1992; 117 (42): 1589–93 (in German). https://doi.org/10.1055/s-2008-1062480.Дудко В.В., Авдеева Е.Ю. Определение чистоты лекарственных средств: методические указания на семинарские и лабораторные занятия. Томск: Лаборатория оперативной полиграфии СибГМУ; 2011.Dudko V.V., Avdeeva Е.Yu. Determination of the purity of medicines: guidelines for seminars and laboratory classes. Tomsk:; 2011 (in Russ.).Государственная фармакопея Российской Федерации XIII издания. URL: https://pharmacopoeia.ru/gosudarstvennayafarmakopeya-xiii-online-gf-13-online/ (дата обращения 15.03.2021).State Pharmacopoeia of the Russian Federation, 13th edition. Available at: https://pharmacopoeia.ru/gosudarstvennaya-farmakopeya-xiiionline-gf-13-online/ (accessed 15.03.2021) (in Russ.).ICH guideline Q3D (R1) on elemental impurities. URL: https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/internationalconference-harmonisation-technical-requirements-registrationpharmaceuticals-human-use_en-32.pdf (дата обращения 15.03.2021).ICH guideline Q3D (R1) on elemental impurities. Available at: https://www.ema.europa.eu/en/documents/scientific-guideline/internationalconference-harmonisation-technical-requirements-registration-pharmaceuticals-human-use_en-32.pdf (accessed 15.03.2021).Stellavato A., Restaino O.F., Vassallo V., et al. Comparative analyses of pharmaceuticals or food supplements containing chondroitin sulfate: are their bioactivities equivalent? Adv Ther. 2019; 36 (11): 3221–37. https://doi.org/10.1007/s12325-019-01064-8.Stellavato A., Restaino O.F., Vassallo V., et al. Comparative analyses of pharmaceuticals or food supplements containing chondroitin sulfate: are their bioactivities equivalent? Adv Ther. 2019; 36 (11): 3221–37. https://doi.org/10.1007/s12325-019-01064-8.Торшин И.Ю., Громова О.А. Экспертный анализ данных в молекулярной фармакологии. М.: МЦНМО; 2012.Torshin I.Yu., Gromova О.А. Expert data analysis in molecular pharmacology. Мoscow; 2012 (in Russ.).Smith P.K., Krohn R.I., Hermanson G.T., et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Anal Biochem. 1985; 150 (1): 76–85. https://doi.org/10.1016/0003-2697(85)90442-7.Smith P.K., Krohn R.I., Hermanson G.T., et al. Measurement of protein using bicinchoninic acid. Anal Biochem. 1985; 150 (1): 76–85. https://doi.org/10.1016/0003-2697(85)90442-7.Brown R., Jarvis K.L., Hyland K.J., et al. Protein measurement using bicinchoninic acid: elimination of interfering substances. Anal Biochem. 1989; 180 (1): 136–9. https://doi.org/10.1016/0003-2697(89)90101-2.Brown R., Jarvis K.L., Hyland K.J., et al. Protein measurement using bicinchoninic acid: elimination of interfering substances. Anal Biochem. 1989; 180 (1): 136–9. https://doi.org/10.1016/00032697(89)90101-2.Walker J.M. (Ed.) Protein protocols handbook. 2nd ed. Totowa, New Jersey: Humana Press; 2002: 11–4.Walker J.M. (Ed.) Protein protocols handbook. 2nd ed. Totowa, New Jersey: Humana Press; 2002: 11–4.Adilakshami T., Laine R.O. Ribosomal protein S25 mRNA partners with MTF-1 and La to provide a p53-mediated mechanism for survival or death. J Biol Chem. 2002; 277 (6): 4147–51. https://doi.org/10.1074/jbc.M109785200.Adilakshami T., Laine R.O. Ribosomal protein S25 mRNA partners with MTF-1 and La to provide a p53-mediated mechanism for survival or death. J Biol Chem. 2002; 277 (6): 4147–51. https://doi.org/10.1074/jbc.M109785200.Pierce™ Rapid Gold BCA Protein Assay Kit. User guide. URL: https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/manuals/MAN0017135_PierceRapidGoldBCAProteinAssayKit_UG.pdf (дата обращения 15.03.2021).Pierce™ Rapid Gold BCA Protein Assay Kit. User guide. Available at: https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/manuals/MAN0017135_PierceRapidGoldBCAProteinAssayKit_UG.pdf (accessed 15.03.2021).Nikolaev I.V., Sforza S., Lambertini F., et al. Biocatalytic conversion of poultry processing leftovers: optimization of hydrolytic conditions and peptide hydrolysate characterization. Food Chem. 2016; 197 (Pt A): 611–21. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2015.10.114.Nikolaev I.V., Sforza S., Lambertini F., et al. Biocatalytic conversion of poultry processing leftovers: optimization of hydrolytic conditions and peptide hydrolysate characterization. Food Chem. 2016; 197 (Pt A): 611–21. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2015.10.114.Torshin I.Yu. The study of the solvability of the genome annotation problem on sets of elementary motifs. Pattern Recognit Image Anal. 2011; 21 (4): 652–62. https://doi.org/10.1134/S1054661811040171.Torshin I.Yu. The study of the solvability of the genome annotation problem on sets of elementary motifs. Pattern Recognit Image Anal. 2011; 21 (4): 652–62. https://doi.org/10.1134/S1054661811040171.Torshin I.Yu. On solvability, regularity, and locality of the problem of genome annotation. Pattern Recognit Image Anal. 2010; 20 (3): 386–95. https://doi.org/10.1134/S1054661810030156.Torshin I.Yu. On solvability, regularity, and locality of the problem of genome annotation. Pattern Recognit Image Anal. 2010; 20 (3): 386–95. https://doi.org/10.1134/S1054661810030156.Torshin I.Yu., Rudakov K.V. On metric spaces arising during formalization of problems of recognition and classification. Part 2: density properties. Pattern Recognit Image Anal. 2016; 26 (3): 483–96. https://doi.org/10.1134/S1054661816030202.Torshin I.Yu., Rudakov K.V. On metric spaces arising during formalization of problems of recognition and classification. Part 2: density properties. Pattern Recognit Image Anal. 2016; 26 (3): 483–96. https://doi.org/10.1134/S1054661816030202.Громова О.А., Калачева А.Г., Торшин И.Ю. и др. Недостаточность магния – достоверный фактор риска коморбидных состояний: результаты крупномасштабного скрининга магниевого статуса в регионах России. Фарматека. 2013; 6 (259): 115–29.Gromova О.А., Kalacheva А.G., Torshin I.Yu., et al. Magnesium deficiency – a reliable risk factor for comorbid conditions: results of large-scale screening of magnesium status in the regions of Russia. Farmateka. 2013; 6 (259): 115–29 (in Russ.).Лиманова О.А., Торшин И.Ю., Сардарян И.С. и др. Обеспеченность микронутриентами и женское здоровье: интеллектуальный анализ клинико-эпидемиологических данных. Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. 2014; 13 (2): 5–15.Limanova O.A., Torshin I.Yu., Sardaryan I.S., et al. Micronutrient provision and women''s health: intellectual analysis of clinicoepidemiological data. Gynecology, Obstetrics and Perinatology. 2014; 13 (2): 5–15 (in Russ.).Торшин И.Ю., Лиманова О.А., Сардарян И.С. и др. Обеспеченность витамином D детей и подростков 7–14 лет и взаимосвязь дефицита витамина D с нарушениями здоровья детей: анализ крупномасштабной выборки пациентов посредством интеллектуального анализа данных. Педиатрия. Журнал им. Г.Н. Сперанского. 2015; 94 (2): 175–84.Torshin I.Yu., Limanova O.A., Sardaryan I.S., et al. Provision of vitamin D in children and adolescents aged 7 to 14 years and the relationship of deficiency of vitamin D with violations of children’s health: the analysis of a large-scale sample of patients by means of data mining. Journal “Pediatria” named after G.N. Speransky. 2015; 94 (2): 175–84 (in Russ.).Барановский Д.С., Демченко А.Г., Оганесян Р.В. и др. Получение бесклеточного матрикса хряща трахеи для тканеинженерных конструкций. Вестник Российской академии медицинских наук. 2017; 72 (4): 254–60. https://doi.org/10.15690/vramn723.Baranovsky D.S., Demchenko A.G., Oganesyan R.V., et al. Acellular tracheal cartilaginous scaffold producing for tissue-engineered constructs. Annals of the Russian Academy of Medical Sciences. 2017; 72 (4): 254–60 (in Russ.). https://doi.org/10.15690/vramn723.Громова О.А., Торшин И.Ю. Магний и «болезни цивилизации». М.: ГЭОТАР-Медиа; 2018.Gromova О.А., Torshin I.Yu. Magnesium and “diseases of civilization”. Мoscow: GEOTAR-Мedia; 2018 (in Russ.).Sim J.S., Jun G., Toida T., et al. Quantitative analysis of chondroitin sulfate in raw materials, ophthalmicsolutions, soft capsules and liquid preparations. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 818 (2): 133–9. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2004.12.015.Sim J.S., Jun G., Toida T., et al. Quantitative analysis of chondroitin sulfate in raw materials, ophthalmicsolutions, soft capsules and liquid preparations. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 818 (2): 133–9. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2004.12.015.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.